小鼠ELISA試劑盒：實驗操作與數(shù)據(jù)分析指南

更新時間：2025-07-14

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　　小鼠ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定）試劑盒是一種用于檢測小鼠血清、細胞培養(yǎng)上清液等樣本中特定蛋白質或生物分子濃度的常用工具。其操作簡便、靈敏度高，廣泛應用于生物醫(yī)學研究和臨床檢測。以下是關于小鼠ELISA試劑盒的實驗操作與數(shù)據(jù)分析的詳細指南。

　　一、實驗操作步驟

　　（一）實驗準備

　　試劑盒平衡：在實驗開始前30分鐘，將試劑盒從冰箱中取出，恢復至室溫。

　　試劑配制：

　　標準品：按照說明書要求，將凍干標準品溶解并稀釋至所需濃度梯度。

　　洗滌液：通常使用蒸餾水按一定比例稀釋。

　　檢測抗體和酶結合物：用稀釋液按指定比例稀釋。

　　（二）加樣與孵育

　　加樣：在酶標板中加入100μL標準品或樣本，標準品需做復孔。加樣時避免氣泡，確保樣本均勻分布。

　　孵育：將酶標板置于37°C孵箱中孵育90分鐘。

　　洗滌：棄去孔內液體，加入350μL洗滌液，浸泡1-2分鐘，甩干，重復4次。

　　（三）檢測抗體與酶結合物孵育

　　加檢測抗體：加入100μL檢測抗體工作液，37°C孵育60分鐘。

　　洗滌：重復上述洗滌步驟。

　　加酶結合物：加入100μL酶結合物工作液，37°C孵育30分鐘。

　　洗滌：重復洗滌步驟。

　　（四）顯色與終止

　　顯色：加入90μL顯色劑，37°C避光顯色15-20分鐘。

　　終止：加入50μL終止液，終止反應。

　　讀數(shù)：在酶標儀450nm波長下測量吸光度值（OD），5分鐘內完成讀數(shù)。

　　二、數(shù)據(jù)分析

　　（一）標準曲線繪制

　　計算平均OD值：計算每個標準品和樣本的平均OD值，減去零孔的OD值。

　　繪制標準曲線：以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪制標準曲線。

　　（二）樣本濃度計算

　　查找濃度：根據(jù)樣本的OD值，在標準曲線上查找對應的濃度。

　　稀釋倍數(shù)校正：如果樣本經(jīng)過稀釋，計算濃度時需乘以稀釋倍數(shù)。

　　（三）注意事項

　　結果異常處理：如果樣本OD值高于標準曲線上限，需重新稀釋樣本后檢測。

　　重復性檢查：標準品和樣本的復孔OD值應具有良好的重復性，否則需重新實驗。

　　三、實驗注意事項

　　試劑保存：未使用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存。

　　避免污染：使用一次性吸頭，避免交叉污染。

　　操作規(guī)范：嚴格按照說明書操作，確保試劑充分混勻。

　　環(huán)境控制：實驗應在室溫（25-28℃）下進行。

　　通過以上操作步驟和數(shù)據(jù)分析方法，可以確保小鼠ELISA試劑盒的實驗結果準確可靠。實驗過程中嚴格遵守操作規(guī)范和注意事項，能夠有效提高實驗的成功率和重復性。

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