人尿道上皮細胞

人尿道上皮細胞需要準備好細胞所要用到的培養基和相關試劑，雖然所有的貼壁，半貼壁或者懸浮細胞處理方式差不多，但是不同的實驗室培養條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在，也會導致對細胞處理不當，  或者環境的不適應而造成細胞的死亡。
人尿道上皮細胞培養物的生理環境不同時定義為其物理化學環境中，更好地理解血清的組件，所必需的增殖的生長因子的鑒定，并更好地理解細胞在培養的微環境（即，細胞 - 細胞相互作用，氣體的擴散，與基質相互作用）現在允許在無血清培養基中某些細胞系的培養。
培養物的主要優點是操縱物理化學（即，溫度，pH，滲透壓，O2和CO2張力）和生理環境（即，激素和營養物濃度），其中所述細胞繁殖的能力。除溫度，將培養環境是由生長培養基進行控制。
對于培養，只要我們細心操作，注意細節，并不是大家說的那樣困難。對于有經驗和有條件的客戶，建議由公司代為培養細胞及進行后續研究

細胞概述

細胞(英文名: cell) 并沒有統一的定義，比較普遍的提法是:細胞是生物體基本的結構和功能單位。已知除病毒之外的所有生物均由細胞所組成，但病毒生命活動也必須在細胞中才能體現。一般來說， 細菌等絕大部分微生物以及原生動物由一個細胞組成，即單細胞生物，高等植物與高等動物則是多細胞生物。細胞可分為原核細胞、真核細胞兩類，但也有人提出應分為三類，即把原屬于原核細胞的古核細胞獨立出來作為與之并列的一 類。研究細胞的學科稱為細胞生物學。細胞體形極微，在顯微鏡下始能窺見，形狀多種多樣。主要由細胞核與細胞質構成，表面有細胞膜。高等植物細胞膜外有細胞壁，細胞質中常有質體，體內有

葉綠體和液泡，還有線粒體。動物細胞無細胞壁,細胞質中常有中心體，而高等植物細胞中則無。細胞有運動、營養和繁殖等機能。

細胞特性:

1)組織來源于實驗動物的正常胃組織。

2)細胞鑒定：廣譜（PCK）或細胞-19（CK-19）免疫熒光染色為陽性。經鑒定細胞純度高于90%。

3)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

4)細胞生長方式：鋪路石狀細胞，不規則細胞，貼壁培養。

產品規格：>5×105細胞數

包裝規格：1ml凍存細胞懸液或T-25培養瓶

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

細胞培養操作

1）復蘇細胞：將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養瓶置于37℃培養箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2-3ml培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。

c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；

a、收集細胞，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。

b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

產品的運輸和保存：

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

2)T-25培養瓶充滿培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

友情提示注意以下幾點：

1、收到細胞后請盡快更換為含15%血清的新鮮培養基，如因特殊情況需要繼續使用原瓶，請在原瓶培養基中額外添加10%的血清

2、貼壁細胞收到當天切忌立刻消化，請將細胞換液后放置培養箱孵育到第二天再做消化傳代，請優先選擇直徑6cm的培養皿進行傳代培養

3、如簽收時出現培養瓶壁破裂，漏液等情況請及時做好照片記錄并聯系實驗室

深圳瑞清生物信息科技有限公司經過數年的努力發展已迅速成為集產品研發、經營為一體的專業化生物工程公司。公司具有完善的實驗技術開發平臺，成熟的抗原、抗體研發系統，熟練掌握各種酶聯技術，結合公司的研發團隊，可以有效的保證公司產品強的穩定性和高的準確性，同時又具有競爭力的價格。 公司主營ELISA試劑盒，目前可以提供生化試劑、分子生物學試劑及試劑盒，各種抗體及免疫學試劑盒、實驗耗材等多門類上萬種產品，產品涉及分子生物學、細胞生物學、免疫學等生命科學的各個領域。